Diabetologia：激活但功能受损的知觉Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身抗基底到注意到1DF癌症临床病征的令人满意亲率在婴幼儿时期就有很好的描述，多个家兔自身抗基底乙型肝炎的婴幼儿中所有70%在血清转换后10年内身患癌症，而随访15年的婴幼儿这一比例增大到84%。来得之下，占临床1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的发病机制还没有得到充分的研究成果。

越来越多的人开始用到分期子系统来假设1DF癌症的令人满意：形态在注意到多种家兔自身抗基底时踏入第1阶段，注意到食欲异常时踏入第2阶段，注意到病征时踏入第3阶段。一些多发家兔自身抗基底乙型肝炎的形态，在1期和2期，令人满意较慢，并转变为发病的1DF癌症。我们之前描述了一三组在首次测定到多种家兔自身抗基底试样后有数10年无癌症的正因如此慢令人满意者，这三组病患人数少，但特征非常确实。随后，我们发现家兔自身抗原酪氨酸CD8+T细胞氢反理应在令人满意很慢的病患中所理论上不普遍存在，但在近期发病和长期普遍存在的癌症病患中所很容易测定到。这不太可能表明，与令人满意病患来得，这些病患致病反理应的调节提升。

以前研究成果表明，尽管调节性T细胞氢(Treg)比例正常，但癌症病患普遍存在一些动态缺陷，其中所包括对IL-2的反理应潜能提高。此外，癌症病患中所的效理应CD4+T细胞氢不太可能对调节不够具抵抗性，表现为效理应T细胞氢的选择性减弱，人为转化成的Treg和基底外转化成的选择性Treg，以及抗原境遇的CD4+T细胞氢中所IL-2反理应减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T细胞氢(Treg)在一小群正因如此很慢令人满意者中所的特征，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁表列确诊的病患亲族中所检查1DF癌症的有不太可能因素。我们之前描述了长期很慢令人满意者的特征，他们保证多重家兔自身抗基底乙型肝炎超过10年，但没有注意到癌症的临床病征，慢性或非开展性致病。随后，10名继续保证无癌症并情愿缺少大量血液试样的很慢令人满意者纳入T和B细胞氢动态分析。在目前的研究成果中所，8名慢令人满意者(SP三组)，中所位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗基底乙型肝炎。所有的大多数人都处于1DF癌症令人满意的1期，尽管一些人随后无法控制了家兔自身抗基底对某些抗原的乙型肝炎反理应，然而，一名病患已经处于2期有数6年，但没有注意到临床病征，一名病患被诊断为癌症，该受试者72岁，在捕获科学实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该供基底开展了单独评核。分离外周血单个氢细胞氢(PBMCs)，采用多数值流式细胞氢术和T细胞氢选择性测试评核供基底中所Treg的频亲率、表DF和动态。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重归)开展无监督聚类分析，评核Treg表DF。

结果：与健康供基底来得，来自慢令人满意基底的失忆CD4+T细胞氢的监督聚类揭示，激来时的失忆CD4+ Treg频亲率增大，与组胺选择性的TNFR系统性蛋白质(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c升高的病患与令人满意很慢者和归一化的对照三组来得，Treg磬并不相同。动态新发现，与健康供基底来得，来自很慢令人满意基底的Treg激来时的CD4+效理应T细胞氢选择性显著受损。表现为对效理应CD4+T细胞氢CD25和CD134隐含的选择性增大。

三幅1 有子系统的表DF分析揭示，CD4+Treg亚DF在慢令人满意链表中所增大。由FlowSOM填充的Treg房，聚集在来自所有供基底的来时CD4+CD45RA -细胞氢上。根据标识物隐含鉴定出10个元簇:失忆T细胞氢_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞氢;HLA-DR + GITR +失忆T细胞氢;内氢Treg_1;内氢Treg_2;内氢Treg_3;和内氢Treg_4。(a)用到9个不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个路由代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，不够大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由三组周围上色。每个路由中所的饼三幅表示单个标识的隐含级别。(b)每个元聚类的热三幅，以揭示整基底标识隐含。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)填充三幅，以及FlowSOM识别子系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说氢素为每个metacluster箱终点站三幅(氢素> 0.05%)确定为HD和SP三组:内氢Treg_2 (e),内氢Treg_3 (f),内氢Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞氢(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞氢(l)。绿色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分三组符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模DF证实，Treg频亲率的增大是令人满意很慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP大多数人和归一化的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞氢上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR隐含开展分离，仿真FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(布氏)三组以及供基底SP 606(绿色)中所CD25+ cd127的频亲率统计三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的箱终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(内氢Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内氢Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内氢Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内氢T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含风力着色，箭头突出的簇被识别子系统为SP和HD链表之间的不同。(j)箱终点站三幅揭示了在SP(布氏)和HD(灰点)三组中所，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的一般来说氢素(比例)。(k)直方三幅揭示每个簇的表DF(粉红色)和Treg标识一般来说隐含与背景隐含(金色);上列，内氢Treg_3;下面一行，内氢Treg_4。背景与所有其他簇中所标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分三组符号秩检验

三幅3 与健康献血者来得，令人满意很慢者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T细胞氢元簇(失忆T细胞氢_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞氢;HLA-DR + GITR +失忆T细胞氢;内氢Treg_2;内氢Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个隐含标识的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的隐含热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中所所有HD(红色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR隐含串连，揭示直方三幅(c)和统计三幅(d)。Wilcoxon分三组符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有供基底包括，p< 0.05(金色)供基底SP 606和归一化的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR隐含，从分级门控，从所有HD(红色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)串连，揭示直方三幅(e)和统计三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon分三组符号秩检验

三幅4 来自很慢令人满意的CD4+ treg细胞氢控制效理应CD4+T细胞氢的潜能提高。SP三组用金色的终点站和橘色表示，HD三组用黑色的终点站和橘色表示，绿色的终点站/橘色表示供基底sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氢开展分选。CD4+CD25−(理应答者)被标识为CFSE, Treg按仔细观察的比例反理应物。用抗CD3 /28微珠还原细胞氢，指导3天后开展流式细胞氢术测定。(a-d)与CD4+理应答者一般来说理应的treg指导(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理应答者指导。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE选择性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性%-。用到乙型肝炎对照(激来时的声势浩大细胞氢不含treg)数值选择性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 效理应CD4+T细胞氢对很慢令人满意的T细胞氢还原的选择性不够尖锐。SP三组用金色的终点站和橘色表示，HD三组用黑色的终点站和橘色表示，绿色的终点站/橘色表示供基底sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氢开展分选。CD4+CD25−(理应答者)被cfsel标识，treg按仔细观察的比例反理应物。用抗CD3 /28微珠还原细胞氢，指导3天后开展流式细胞氢术(CD25反染)和细胞氢因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606理应答者一同指导。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE选择性百分亲率(b)。(c,d) CD25选择性百分亲率(c)和CD134选择性百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中所的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自很慢令人满意子的还原失忆CD4+Treg在GITR隐含中所得到了扩展和丰富多彩，忽视了进一步研究成果Treg在1DF癌症风险形态中所的差异性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28