Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中的逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞核分裂自身免疫底物到经常出现1标准型哮喘针灸病症的成效领军在学龄前后期就有不太好的所述，多个肝细胞核分裂自身免疫底物HIV的学龄前当中曾70%在抗体匹配后10短期内患上哮喘，而随访15年的学龄前这一比率增高到84%。相比之下之下，占针灸1标准型哮喘一半以上的标准型1标准型哮喘的发作机制还不会想得到充分的数据分析。

更多的人开始可用分期系统来定义1标准型哮喘的成效：变异在经常出现多种肝细胞核分裂自身免疫底物时踏入第1阶段，经常出现胰岛素异常时踏入第2阶段，经常出现病症时踏入第3阶段。一些多发肝细胞核分裂自身免疫底物HIV的变异，在1期和2期，成效较较快，并发展为发作的1标准型哮喘。我们之前所述了都由成员在首次检测到多种肝细胞核分裂自身免疫底物样品后有数10年无哮喘的近乎较快成效者，这组成员病患者多人少，但构造非常明确。随后，我们发掘出肝细胞核分裂自身抗原特异性CD8+T细胞核分裂底物在成效很较快的病患者当中基本不存在，但在近期发作和曾一度存在的哮喘病患者当中很较难检测到。这似乎表明，与成效病患者相比之下，这些病患者致病底物的调节增强。

后期数据推断，尽管调节性T细胞核分裂(Treg)数量正常，但哮喘病患者存在一些系统缺陷，其当中之外对IL-2的底物潜能减少。此外，哮喘病患者当中的effectCD4+T细胞核分裂似乎对调节更具抵抗性，平庸为effectT细胞核分裂的抑制作用西移动，自然消除的Treg和肾脏消除的其会Treg，以及抗原历程的CD4+T细胞核分裂当中IL-2底物西移动。本数据分析的目的是所述了CD4+调节性T细胞核分裂(Treg)在一小群近乎很较快成效者当中的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方式：BOX数据分析是一项以一些人结合的纵向数据分析，在21岁以下患病的病患者亲友当中检验1标准型哮喘的危险因素。我们之前所述了曾一度很较快成效者的构造，他们维持多重肝细胞核分裂自身免疫底物HIV超过10年，但不会经常出现哮喘的针灸病症，较快性或非顺利完成性致病。随后，10名继续维持无哮喘并愿意提供大量血浆样品的很较快成效者扩及T和B细胞核分裂系统比对。在目前的数据分析当中，8名较快成效者(SP组成员)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肝细胞核分裂自身免疫底物HIV。所有的行动者都西北面1标准型哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞核分裂自身免疫底物对某些抗原的HIV底物，然而，一名病患者已经西北面2期有数6年，但不会经常出现针灸病症，一名病患者被临床为哮喘，该测试者72岁，在采集物理样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据比对当中对该NADPH顺利完成了单独审计。除去外周血单个核分裂细胞核分裂(PBMCs)，采用多匹配流式细胞核分裂练成和T细胞核分裂抑制作用试验性审计NADPH当中Treg的kHz、表标准型和系统。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)顺利完成无监理聚类比对，审计Treg表标准型。

结果：与肥胖NADPH相比之下，来自较快成效体的清醒CD4+T细胞核分裂的监理聚类推断，激光阴的清醒CD4+ TregkHz增高，与糖皮质激素其会的TNFR无关蛋白(GITR)解读增高有关。一名HbA1c增大的病患者与成效很较快者和匹配的对照组成员相比之下，Treg著者有所各不相同。系统比对表明，与肥胖NADPH相比之下，来自很较快成效体的Treg介导的CD4+effectT细胞核分裂抑制作用突出受损。平庸为对effectCD4+T细胞核分裂CD25和CD134解读的抑制作用增高。

示意图1 深入的表标准型比对推断，CD4+Treg亚标准型在较快成效路由表当中增高。由FlowSOM聚合的Treg室，组织起来在来自所有NADPH的光阴CD4+CD45RA -细胞核分裂上。根据标示出物解读鉴别出10个元簇:清醒T细胞核分裂_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞核分裂;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核分裂;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)可用9个各不相同Treg标示出聚合的10个元簇的MST。每个路由器都是一个一个大(100个一个大)，相当大的元一个大(10个元一个大)在路由器组成员周围上色。每个路由器当中的饼示意图说明单个标示出的解读高级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整体标示出解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)聚合示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说总质量为每个metacluster箱子3](总质量> 0.05%)已确定为HD和SP组成员:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞核分裂(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞核分裂(l)。橙色红色都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 可用CITRUS的预测模标准型证实，TregkHz的增高是成效很较快的标志。分级离子通道(a - f)和甜菜比对(g-k)比较SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞核分裂上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都是性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成除去，实时FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及NADPHSP 606(橙色)当中CD25+ cd127的kHz汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道兄集的箱子3];(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)棉花簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风力着色，交叉突出的簇被识别为SP和HD路由表密切关系的各不相同。(j)箱子3]推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员当中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说总质量(比率)。(k)直方示意图推断每个簇的表标准型(粉色)和Treg标示出相对来说解读与取材解读(黄色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。取材与所有其他簇当中标示出的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与肥胖献血者相比之下，成效很较快者清醒treg的GITR增高。每个清醒CD4+T细胞核分裂元簇(清醒T细胞核分裂_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞核分裂;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核分裂;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个解读标示出的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的解读热示意图(sp606不之外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读组合成，推断直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有NADPH之外，p< 0.05(黄色)NADPHSP 606和匹配的HD不之外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR解读，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橙色)组合成，推断直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自很较快成效的CD4+ treg细胞核分裂控制effectCD4+T细胞核分裂的潜能减少。SP组成员用黄色的支线和红色说明，HD组成员用黑色的支线和红色说明，橙色的支线/红色说明NADPHsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核分裂顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被标示出为CFSE, Treg按通过观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞核分裂，培植3在此之后顺利完成流式细胞核分裂练成检测。(a-d)与CD4+；也者相对来说应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培植。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。可用HIV对照(激光阴的拥护细胞核分裂不含treg)近似值抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 effectCD4+T细胞核分裂对很较快成效的T细胞核分裂光阴化的抑制作用更极端。SP组成员用黄色的支线和红色说明，HD组成员用黑色的支线和红色说明，橙色的支线/红色说明NADPHsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核分裂顺利完成分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示出，treg按通过观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞核分裂，培植3在此之后顺利完成流式细胞核分裂练成(CD25反染)和细胞核分裂因兄比对。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培植。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑制作用倍数(b)。(c,d) CD25抑制作用倍数(c)和CD134抑制作用倍数(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植当中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们推断的论证是，来自很较快成效兄的光阴化清醒CD4+Treg在GITR解读当中想得到了扩充和比较丰富，合理化了进一步数据分析Treg在1标准型哮喘高风险变异当中的值得注意的必要性。

注解记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28